Contribuição ao estudo proteômico do ciclo de vida de Moniliophthora perniciosa

Moniliophthora perniciosa é o fungo causador da vassoura de bruxa no cacaueiro (Theobroma cacao L.). Ele apresenta um ciclo de vida hemibiotrófico, com uma fase biotrófica e uma fase necrotrófica. A fase biotrófica, iniciando a doença, é caracterizada por um micélio monocariótico, enquanto a fase necrotrófica é caracterizada por um micélio dicariótico levando a morte dos tecidos vegetais. O estudo da fase necrotrófica é efetuado em bolacha, o único meio sólido permitindo a obtenção de basidiomas e, por conseqüência, das únicas estruturas infecciosas do fungo, os basidiósporos. Durante o cultivo de M. perniciosa em bolachas, 6 diferentes fases de desenvolvimento foram observadas: i) a fase branca, fase inicial do cultivo do fungo (? 35 dias); ii) a fase amarela (? 37 dias) ; iii) a fase rosa (? 40 dias) ; iv) a fase rosa escuro, ou pre-estresse hídrico (? 45 dias); v) o primórdio (? 60 dias) ; e vi) o basidioma (? 75 dias). O objetivo deste trabalho foi de identificar proteínas específicas envolvidas em cada uma destas fases, em particular na fase de formação do basidioma e na fase de estresse hídrico necessaria e preliminar à formação do corpo de frutificação. Foi estabelecido um método de extração de proteínas a partir das bolachas, e em seguida, foram utilizadas técnicas de eletroforese (SDS-PAGE e eletroforese bidimensional/2-D) a fim de identificar perfis protéicos específicos de cada fase. Bandas (SDS-PAGE) ou spots (2-D) visualizados por eletroforese foram em seguida cortados dos geis e analisados por espectrometria de massas. Foram identificadas varias proteínas potencialmente envolvidas na formação do basidioma, e podendo constituir bons candidatos para futuras análises necessárias à compreensão do modo de propagação do fungo. (Résumé d'auteur)